細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

B16-F0 (小鼠黑色素瘤細(xì)胞)

商品屬性

商品介紹

別稱 B16/F0; B16F0

種屬 小鼠

年齡（性別） 不詳

組織來源 皮膚

生長特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

參考資料(來源文獻(xiàn))

生物安全等級 1

生長培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:4-1:6

推薦換液頻率 2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

致瘤性 Yes, in syngeneic mice

注意事項 B16系列細(xì)胞，使用DMEM培養(yǎng)時可能出現(xiàn)黑色素快速積累，細(xì)胞不增殖或死亡的情況，若您需要分泌黑色素相關(guān)實驗可更換為DMEM培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：

（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時，進(jìn)行傳代。

（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。

（3）加入覆蓋瓶底量的且含有EDTA。

（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，加入2倍量的中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。

（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。

（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。

（9）細(xì)胞凍存

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

公司正在出售的產(chǎn)品：

兔子補(bǔ)體片斷3a(C3a)ELISA 試劑盒

Human vascular endothelial cell growth factor D (VEGF-D) ELISA Kit 人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子D(VEGF-D)檢測試劑盒

Humansystemiclupuserythematosus,SLEELISAKit 人系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanE-Selectin檢測試劑盒人E選擇素(E-Selectin/CD62E)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織S6KINASE激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

Humanosteoclastdiffereiationfactor,ODFELISAKit人破骨細(xì)胞分化因子(ODF)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

ACHE重組小鼠 Acetylcholinesterase / ACHE 蛋白 Protein

AR (Androgen Receptor 0.5mgAR (Androgen Receptor)peptide 雄激素受體(多肽抗原)

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IL24 Protein Human 重組人 IL-24 / MDA-7 蛋白

VEGFC Protein Rat 重組大鼠 VEGFC / VEGF-C 蛋白 (aa 108-223, Fc 標(biāo)簽)

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B16-F0 (小鼠黑色素瘤細(xì)胞)豚鼠干擾素γ(IFNγ)檢測試劑盒 ，英文名： IFNγ ELISA Kit

Human calcium binding protein (CR) ELISA Kit 人鈣結(jié)合蛋白(CR)檢測試劑盒

rabbitbrainnaiureticpeptide,BNPELISAKit 兔子腦素/腦尿肽(BNP)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBACE1(HumanBeta-siteAPP-CleavingEnzyme1)ELISAkit人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1

線蟲果蠅轉(zhuǎn)座子Mos1熱休克誘導(dǎo)突變試劑盒10次

rabbitbrainnaiureticpeptide,BNPELISAKit兔子腦素/腦尿肽(BNP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TFR2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human TFR2 (ansferrin Receptor 2) ELISA Kit

人游離睪(F-TESTO)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human F-TESTO (Free Testosterone) ELISA Kit

人轉(zhuǎn)移因子(TF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human TF (ansfer Factor) ELISA Kit

人轉(zhuǎn)運蛋白1(TNPO1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human TNPO1 (anspoin 1) ELISA Kit