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5-FITCg說明書 | g | 來電可享受優(yōu)惠 |
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注意事項:
5-FITCg說明書● 溶液PE *次使用前請按瓶上標簽加入4 倍體積的無水乙醇,即5 ml 溶液PE 中加入60 ml 無水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產品對電泳使用的Agarose 種類沒有嚴格限制,可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質量和DNA 回收效率,希望使用高純度的Agarose ,但沒有必要一定要使用低熔點的Agarose 等。
● 電泳時請使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。
● 請適當延長電泳時間,在條帶分離清晰后進行切膠回收,以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率,切膠時應盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強。但如果DNA 濃度小,或DNA 初始量少,回收率將會偏低。
● 溶液Eluent(0 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA 片段可直接用于各種酶促反應等,不會影響后續(xù)試驗。
● 為了保證回收效率,請不要使用未調整pH 值的超純水洗脫目的片段。
● 請嚴格按照操作步驟操作。
問:常用的DNA 濃度及純度檢測方法有哪些?
5-FITCg說明書答:回收得到的DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過對比定量的Marker 來定量濃度;紫外分光檢測OD260/280 比值,OD260/280 比值在.7-.9 之間說明所得 DNA 純度較好,如果洗脫時不使用溶液Eluent而使用去離子水,比值會偏低,因為pH 值和離子存在會影響光吸收值,但不表示純度低。
問:長片段回收時應注意哪些問題?
答:5-FITCg說明書當DNA 片段長度較長(5 kb 以上)時,回收效率會有所下降,這是DNA 切膠回收時的常見現(xiàn)象。此時建議按以下方法解決問題:
適當增加待回收DNA 樣品的點樣量;
2 由于長片段DNA 不易從樹脂上洗脫下來,建議洗脫兩次,可以提高洗脫效率;
3 減少操作過程中對長片段DNA 的物理損傷,如混合振蕩操作不要過于劇烈,切膠時不要將DNA 長時間暴露在紫外等下。
0.56-0 ng/mL ELISA Kit for Human S-phase kinase-associated protein 2
0.56-0 ng/mL ELISA Kit for Human Gamma-aminobutyric acid receptor subunit alpha-2
0.32-20 ng/mL ELISA Kit for Human Transcription factor SOX-9
EpCAM / TROP- / TACSTD 抗體, 鼠單抗 ELISA 50 µg
0.56-0 ng/mL 人二肽基肽酶9(DP9)ELISA試劑盒
.56-00 U/mL ELISA Kit for Human Aquaporin-4
IGSF8 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA 50 µg
BMPR2 / BMPR-II 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA 50 µg
0.78-50 ng/mL 人ATP依賴RNA解旋酶DDX42(RNAHP)ELISA試劑盒
ABHD4 抗體, 兔多抗 ELISA 400 µg
78-5000 pg/mL 人PMCHL蛋白ELISA試劑盒
5-FITCg說明書TE-3(人食管細胞)5×06cells/瓶×2
P3/NSI/-Ag4- [NS-] (小鼠骨髓瘤細胞)人胰腺細胞
J82(人膀胱細胞)5×06cells/瓶×2
線粒體肌酸激酶A(CKMTA)重組蛋白英文名稱:Recombinant Creatine Kinase, Mitochondrial A (CKMTA)
BHK-2(倉鼠腎細胞)5×06cells/瓶×2
我妻氏培養(yǎng)基基礎/我妻氏血瓊脂培養(yǎng)基基礎/Wagstsuma Agar Base用于副溶血性弧菌的溶血試驗250克國產/進口
NC膜(0.22um)30cm × 3m,5cm x 20cm30cm × 3m,5cm x 20cmgersion
現(xiàn)隱肉湯/Presence Absence Broth水中大腸菌群計數(shù)250克國產/進口
IMDM培養(yǎng)基/IMDMBR0升國產/進口
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)英文名稱:PC-2(高分化)
USP6氨基端樣蛋白(USP6NL)重組蛋白英文名稱:Recombinant USP6 N-Terminal Like Protein (USP6NL)
操作步驟:
5-FITCg說明書切取含有目的DNA 片段的瓊脂糖凝膠條帶。
● 盡量切除不含有目的DNA 部分的凝膠,減少凝膠體積,提高DNA 回收率。
● 切膠時,請使用長波長UV (360 nm )光盒。且不要將DNA 長時間暴露在紫外燈下,以防DNA 損傷。
2 稱取凝膠的重量近似地確定其體積。
● 凝膠重量的稱量方法:取.5 ml 離心管電子天平稱初質量,切膠裝在離心管后稱終質量,兩者差即為膠的質量。不同離心管的重量可能有差異,因此,每個離心管的重量需單獨稱量。
3 按照每00 mg 瓊脂糖凝膠對應00 µl 溶液BD 的比例,向離心管中加入溶液BD。
4 50 ℃水浴7-0min,直至凝膠*溶化。期間需要振蕩混合3 次。
● 瓊脂糖必須*融化,以免堵塞柱子,嚴重影響DNA 段的回收效率。
● 如果總體積大于500 µl,可適當增加溶膠時間。
● 若此時溶液變紅,可加0 µl 3M NaAC (pH 5.2)。
5 將步驟4 所獲溶液置于DNA 純化柱中,靜置2min 。
● 膠塊*溶解后將膠溶液溫度降至室溫再上柱,因為純化柱在較高溫度時結合DNA 的能力較弱。
6 2,000 rpm 離心min。若溶液量大于DNA 純化柱的容積,可分兩次離心,棄濾液。
● 此時DNA 被吸附于DNA 純化柱中的硅膠膜上。
7 加入500 µl 溶液BD。2,000 rpm, 離心min,棄濾液
8 加入500 µl 溶液PE。2,000 rpm, 離心min,棄濾液。
● 溶液PE 初次使用前用無水乙醇按: 4 稀釋,即含80% 乙醇。
● 此步驟的作用是將硅膠膜上吸附的蛋白、鹽等雜質洗脫,以獲得高質量DNA 段。
9 加入500 µl 溶液PE。2,000 rpm, 離心min,棄濾液。
0 2,000 rpm 離心 3min ,以*去除純化柱中的液體。
● 此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免殘留乙醇影響后續(xù)酶促反應。同時也利于DNA 段的充分溶解。
將離心柱置于新的.5 ml 離心管中。向純化柱的處,懸空滴加30-00 µl 溶液Eluent (60℃預熱),靜置2min 。2,000 rpm 離心min,管底即為目的DNA 段。貯存于-20℃。
● 溶液Eluent 可用無菌雙蒸水代替,但其pH 需為8.0-8.5,加入體積視DNA 目的段的多少、用戶對目的濃度要求而定。
● 對溶液Eluent 60℃預熱,會提高提取DNA 目的段的產量。