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大鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細胞提取物圖片

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Rat Brain: Normal Nerve Microglia Derivatives

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大鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細胞提取物【Rat Brain: Normal Nerve Microglia Derivatives】
     大鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細胞提取物圖片大鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細胞提取物是從大鼠原代神經(jīng)小膠質(zhì)細胞提取的,大鼠原代神經(jīng)小膠質(zhì)細胞從正常大鼠腦組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備:利用Qiagen RNeasy KitTrizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。        cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA*鏈,以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及0mgRNA。68℃反應(yīng)0min 后終止RT反應(yīng)。利用x RT Buffer 運輸cDNA μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。        潛在的應(yīng)用: <>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達圖譜。
培養(yǎng)步驟:
大鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細胞提取物圖片對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按:2到:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按:2到:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按:2到:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。?

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兔抗TH (Phospho-Ser3)多克隆抗體 英文名:Anti-TH (Phospho-Ser3) rabbit polyclonal

兔抗TH(Phospho-Ser40) 多克隆抗體 英文名:Anti-TH(Phospho-Ser40) rabbit polyclonal antiboy 冷凍(-20℃)

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兔抗CTNNB (Phospho-Ser33)多克隆抗體 英文名:Anti-CTNNB (Phospho-Ser33) rabbit polyclonal

兔抗EGFR (Phospho-Tyr72)多克隆抗體 英文名:Anti-EGFR (Phospho-Tyr72) rabbit polyclonal

兔抗EIF4EBP(Phospho-Thr46)多克隆抗體 英文名:Anti-EIF4EBP(Phospho-Thr46) rabbit polyclonal antiboy 冷凍(-20℃) 避光

兔抗STMN (Phospho-Ser25)多克隆抗體 英文名:Anti-STMN (Phospho-Ser25) rabbit polyclonal

兔抗STMN (Phospho-Ser38)多克隆抗體 英文名:Anti-STMN (Phospho-Ser38) rabbit polyclonal

大鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細胞提取物圖片Calcium phytate 植酸鈣 365-82-5  20mg

TRIS-HCl Tris鹽酸 500g  瓶

(Herring sperm) 鯡魚精DNA g  瓶

Nonidet P- 40 Substitute NP-40 00ml  瓶

Coomassie brilliant blue R250 考馬斯亮藍R250 0g  瓶

Deoxycholic acidsodium salt 脫氧膽酸鈉 25g  瓶

Maleicacid 馬來酸 00g  瓶

Tetrodotoxin 毒素 4368-28-9  mg

Kinetin 6-糠氨基嘌呤(激動素) 5g  瓶

Pepstatin A 抑制劑 5mg  支

Nimbin 印楝素 5945-86-8  5mg

注意事項:
. 接收到大鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細胞提取物圖片,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞00X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。 

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