大鼠脈絡(luò)膜組織提取物注意事項(xiàng):
1. 接收到大鼠脈絡(luò)膜組織提取物說明書,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞00X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%*-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
8. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,需密切關(guān)注培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定性,包括溫度、濕度及CO?濃度的精確控制,任何微小的波動都可能影響細(xì)胞的生長狀態(tài)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果。建議定期使用校準(zhǔn)設(shè)備檢查培養(yǎng)箱的性能,確保其處于最佳工作狀態(tài)。
9. 細(xì)胞培養(yǎng)液應(yīng)定期更換,一般根據(jù)細(xì)胞生長速度和培養(yǎng)基顏色變化決定,通常不超過三天一次。更換前,務(wù)必對新的培養(yǎng)基進(jìn)行預(yù)熱至37℃,以減少對細(xì)胞的熱沖擊。
10. 為避免交叉污染,所有與細(xì)胞接觸的物品,如吸管、培養(yǎng)瓶、離心管等,必須嚴(yán)格遵循一次性使用或經(jīng)過的清洗、消毒及滅菌處理。
11. 在進(jìn)行細(xì)胞傳代或?qū)嶒?yàn)操作時(shí),建議穿戴實(shí)驗(yàn)服、手套及防護(hù)眼鏡,以保護(hù)個(gè)人安全及防止微生物污染。操作前后,雙手需用含酒精的手部消毒劑消毒。
12. 記錄實(shí)驗(yàn)日志,詳細(xì)記錄每一步操作的時(shí)間、條件變化、觀察到的現(xiàn)象及任何異常情況,這對于后續(xù)數(shù)據(jù)分析及實(shí)驗(yàn)復(fù)現(xiàn)至關(guān)重要。
13. 若細(xì)胞生長出現(xiàn)異常,如污染、生長緩慢或形態(tài)改變,應(yīng)立即停止使用,并查找原因。必要時(shí),可咨詢實(shí)驗(yàn)室資深技術(shù)人員或查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料,以獲取解決方案。
14. 最后,所有廢棄的細(xì)胞培養(yǎng)物及實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理規(guī)定妥善處理,防止對環(huán)境造成污染。